基金目：中国石油化工集团公司资助项目（J100010）。

　　随着润滑油的广泛使用，其生物毒性对环境的影响越明显。矿物润滑油对地下水的污染影响可达100年，撤量矿物油会阻碍植物的生长和毒害水生生物，约0.1Jig/g的矿物油即可使水生壳类生物减寿20%m.因此，有必要研究润滑油的生物毒性。

　　我国在1995年颁布了《水质急性毒性的测定??发光细菌法》，但其适用范围只限于在水中可溶性化学物质的水质急性毒性监测。对于较难溶于水的试验物质，也有学者采用增溶剂或超声波技术等方法增溶；但这些方法可能会改变试验物质的自然性质，并导致非代表性的生态毒性关系。美国ASTM于1998年公布了“润滑油毒性测试：样品液制备方法的标准”。国内外一些学者有采用此标准制备样品液，用珊湖虫、章鱼仔、海蜗牛、水螅等海生生物研究原油和石油产品的生物毒性。这些海洋生物对石油类物质的生物毒性耐受性较强，试验时间相对较长，成本较篼。

　　本文参照国内、外的相关标准，建立了一套利用发光细菌检测润滑油急性毒性的试验方法，并成功地检测出各种润滑油的急性生物毒性大小。

　　1试验原理、试验设备和试验方法1.1试原理发光细菌急性毒性试验亦称Microtax生物毒性试验，它以明亮发光杆菌（photobacteriumphosphoreum）作指示生物，以其发光强度的变化为指示，测定环境中有害有毒物质的生物毒性。当有毒有害物质与发光细菌接触时，发光强度立即改变，并随着毒物浓度的增加而发光减弱。这种发光强度的变化，可用精密测光仪器定量测定。

　　1.2试验菌种和试验仪器选用明亮发光杆菌T3小种作为菌种。发光细菌的制备有2种方法：一种是发光细菌新鲜菌悬液的制备，另一种是发光细菌冻干粉复苏法其中冻干粉复苏法是国家标准方法，其优点是可实行质量控制，冻干粉可长期保存方便使用，操作简便，节约时间本文试验采用冻干粉复苏法，菌种由中国科学院南京土壤研究所提供。

　　测光仪器选用国产DXY-2型生物毒性测试仪（中国科学院南京土壤研究所仪器厂生产），其工作原理如所示1.3试方法由于润滑油在自然条件下很难溶于水，因此本文采用半数效应载荷（medianeffectload，ELW）作为润滑油在水中生物毒性的判定指标，并采用载荷率（loadingrate，加人的试验材料与含水介质之比）来衡童润滑油与水的量化关系。

　　为了模拟自然条件下润滑油的典型污染情况，本文参照美国ASTM6081-98标准中的样品制备方法准备样品液，使用水融合组分（wateraccommodatedfraction，WAF）方法制备试验样品液。

　　WAF溶液的制备如和所示。搅拌榉应该以适当的速度运转，以保证液面旋涡的深度为WAF溶液制备容器中试验溶液高度的10% ~35%.搅拌时应注意旋转速度，不要把试验材料向下拉到容器的底部，并且搅拌速度不要过快，以免产生乳化现象。

　　在制备WAF溶液时，为了使润滑油和水溶液充分融合，需要一定的搅拌时间随着搅拌时间的延长，水中油的含童增加，但增加量逐渐平缓根据Gir-ling的建议，一般需要搅拌20~24h.搅拌后，应沉淀1~2h因为本文选用的试验生物是海生发光细菌，这种发光细菌需要在含盐水溶液中生存，因此，将加有3%NaCl的蒸馏水作为准备WAF中的水溶液和稀释水溶液。

　　采用发光细菌冻干粉复苏法制备试验用发光细菌液，并测定标准毒物化汞（HgCl）的￡（值是否在0.1±0.02mg/L的范围内，以检测制备的发光细菌液是否合格。

作者：佚名　　来源：中国润滑油网